根据实验结果优化PCR体系，pcr反应体系的优化包括哪些具体内容?！

今天给各位分享根据实验结果优化PCR体系的知识，其中也会对pcr反应体系的优化包括哪些具体内容?进行解释，如果能碰巧解决你现在面临的问题，别忘了关注本站，现在开始吧！

本文目录一览：

• 『壹』、PCR产物的电泳条带不够亮,为何?如何优化PCR反应体系
• 『贰』、PCR反应条件如何选取及优化?
• 『叁』、pcr扩增dna电泳基因偏大的原因
• 『肆』、PCR条件优化
• 『伍』、PCR实验结果出现多条条带,如何进行优化?
• 『陆』、PCR技术的优化

PCR产物的电泳条带不够亮,为何?如何优化PCR反应体系

如果条带不够亮根据实验结果优化PCR体系，还有拖尾、非特异条带、引物二聚体等问题根据实验结果优化PCR体系，那就是根据实验结果优化PCR体系你反应体系中需要优化。

条带不明显的意思是由你要的目标条带，但是，条带不亮对吧！那么可以试一下下列办法 1 在反应体系中加入稍为多一些的Mg离子 2 降低反应的温度 3 调整模板量，模板量太多或者太少均得不到很亮的条带。

引物、模板没问题的话，就加cycle，多扩几轮，就亮根据实验结果优化PCR体系了。（一般pcr酶和buffer是没有问题的，除非你反复冻融或者长时间放置室温）如果上一轮扩出来特异性好的话，可以适当降低退火温度。

如果点样没有误差的话，那应该是PCR仪的问题了，半导体PCR仪用的时候长了，中间和四周温度有误差，温度控制不准，这个产物自然就不同了。可以让厂家给测试一下。或者换一下散热模块之类的。

PCR反应条件如何选取及优化?

测序反应预实验主要需要优化：筛选合适的DNA模板、优化PCR反应条件。筛选合适的DNA模板：DNA模板的质量和纯度对于测序反应的成功具有重要影响。在预实验中需要尝试不同的DNA提取方法，筛选出纯度高、质量好的DNA模板。

PCR反应的延伸温度一般选取在70～75℃之间，常用温度为72℃，过高的延伸温度不利于引物和模板的结合。PCR延伸反应的时间，可根据待扩增片段的长度而定，一般1Kb以内的DNA片段，延伸时间1min是足够 的。

下面就各种温度的选取作一介绍。 模板变性温度变性温度是决定PCR反应中双链DNA解链的温度，达不到变性温度就不会产生单链DNA模板，PCR也就不会启动。变性温度低则变性不完全，DNA双链会很快复性，因而减少产量。一般取90～95℃。

PCR反应进行的条件：引物（PCR引物为DNA片段，细胞内DNA复制的引物为一段RNA链）、酶、dNTP、模板和缓冲液（其中需要Mg2+）。引物有多种设计方法，由PCR在实验中的目的决定，但基本原则相同。

pcr扩增dna电泳基因偏大的原因

模板DNA带。模板浓度过高时可能出现。如果是基因组DNA为模板，条带可能会很乱且较大。

很宽极有可能是扩增出两个或多个大小相近的片段，这种片段测序结果往往都是乱封，是多个序列测序结果叠加在一起的。解决办法，更换特异引物，或者胶浓度加大，比如2%的。

就看扩增的模板是什么，是否中间有内含子序列，重新核查从正向引物到反向引物的大小。如果这些都检查根据实验结果优化PCR体系了没问题，可以考虑把产物测序，通过序列比对找出原因。

pcr产物电泳检测的结果只是一个粗略的定性结果。对于与目的片段条带大小只相差几个碱基的非特异性pcr扩增产物是无法用肉眼区分开的。但是dna测序反应敏感而客观，可以直接反应出模板本身的情况。

根据实验结果优化PCR体系你的PCR目的产物是否比较小，而母液DNA片段比较大，你电泳时间偏长，导致小分子片段已经跑出了凝胶。

PCR技术的基本原理类似于DNA的天然复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。

PCR条件优化

扩增的目的产物条带较弱或不能检测到相应的条带。 试剂不合格；PCR仪有故障；扩增程序设置错误。 在两台不同的PCR仪上用新鲜购买的试剂与老的试剂分别进行PCR，比较其扩增产物结果。复性条件不是最合适的。

引物比较好在模板cDNA的保守区内设计。引物长度一般在15-30碱基之间。引物GC含量在40%-60%之间，Tm值比较好接近72℃。引物3′端要避开**子的第3位。引物3′端不能选取A，比较好选取T。

可从退火温度、延伸温度与时间、镁离子浓度、底物浓度、引物浓度、模板质量等考虑，一般而言，现在PCR试剂盒已经非常好了，大多实验无需做优化即可得到很好结果。如有问题，一般会是引物、退火温度、延伸温度或模板质量等原因。

扩增量 使用Taq DNA Polymerase进行PCR产物克隆及食品、环境卫生检验等时，扩增量常常达不到要求。

出现多条条带表示PCR反应的特异性不高，可以进行如下优化尝试：适当提高PCR的退火温度。退火温度越高，DNA分子之间的配对越困难。这样可以减少引物与模板之间非特异性的结合。

扩增结果通过紫外透射检测：电泳是一般胶含有EB，可染色核酸，在紫外光激发下发出荧光，进行检测。同时DNA Marker 是一系列碱基数目大小比较明确条带，电泳时越靠近点样孔，条带的碱基数目越大，反之越小。

PCR实验结果出现多条条带,如何进行优化?

改善PCR反应条件根据实验结果优化PCR体系，从根据实验结果优化PCR体系你提供的情况看根据实验结果优化PCR体系，55度退火太低。建议做个温度梯度PCR，在55度到67度间，每升高2度，做一个反应。另建议将反应体系设为20微升（温度升降过程易于达到目标值）。

一般这种情况下是调高退火温度。如果还是有很多条带，那么就证明你的引物特异性有问题，建议你重新设计引物，或者是切胶回收目的条带。

染料是什么？我用过几种核酸染料感觉还是EB亮度比较好，虽然 毒性 大了点。如果条带不够亮，还有拖尾、非特异条带、引物二聚体等问题，那就是你反应体系中需要优化。

如果怀疑第一次引物造成了两次引物之间相互配对引起多条带扩增，建议第二次PCR做个交叉实验做对照，就知道是否混合引起了。如果是混合引起，建议：减少第一次引物的量，并增加循环次数，尽量消耗完首次引物。

扩增结果通过紫外透射检测：电泳是一般胶含有EB，可染色核酸，在紫外光激发下发出荧光，进行检测。同时DNA Marker 是一系列碱基数目大小比较明确条带，电泳时越靠近点样孔，条带的碱基数目越大，反之越小。

PCR技术的优化

『壹』、可从退火温度、延伸温度与时间、镁离子浓度、底物浓度、引物浓度、模板质量等考虑，一般而言，现在PCR试剂盒已经非常好了，大多实验无需做优化即可得到很好结果。如有问题，一般会是引物、退火温度、延伸温度或模板质量等原因。

『贰』、PCR技术操作简便，特异性强，敏感度极高，正因为敏感度高，很容易受其他因素的影响，因此要得到准确可靠的反应结果，需根据不同的模板，摸索最适合的条件，配制出PCR反应试剂。

『叁』、优化MgCl模板DNA、热稳定DNA聚合酶及dNTP的浓度。

『肆』、出现多条条带表示PCR反应的特异性不高，可以进行如下优化尝试：适当提高PCR的退火温度。退火温度越高，DNA分子之间的配对越困难。这样可以减少引物与模板之间非特异性的结合。

根据实验结果优化PCR体系的介绍就聊到这里吧，感谢你花时间阅读本站内容，更多关于pcr反应体系的优化包括哪些具体内容?、根据实验结果优化PCR体系的信息别忘了在本站进行查找喔。